Fichier ColorationBleuColloidal.doc
Personne référente : Véronique Santoni
Date : Mai 2000
Travailler impérativement sous sorbonne

Fixation :
Pour une durée minimum de 2 heures, dans 500 ml par gel :
20% acide phosphorique (85%), 50% éthanol

Lavages :
3 fois 30 min dans H2O

Incubation :
Pour une durée de 1 heure :
34% méthanol, 17% sulfate d’ammonium (P/V), 2% acide phosphorique

Coloration :
Pour une durée minimum de 4 jours un équilibre de coloration :
34% méthanol, 17% sulfate d’ammonium (P/V), 2% acide phosphorique
plus colloïdal coomassie G-250 à 0,066% (0,66 g/l)

Fixation du gel :
pendant 1 h, sous agitation dans une solution contenant 30% d’éthanol et 10% d’acide acétique

Coloration :
– Préparation de la solution de Bleu G colloïdal
Utiliser le solution commercialisée par Sigma (ref B2025). Reconstituer, selon les instructions du fournisseur, la solution concentrée de Bleu G (200 ml) en rajoutant 800 ml d’eau. Conserver cette solution reconstituée à 4°C

– Coloration du gel
Mélanger 4 volumes de solution reconstituée avec 1 volume éthanol technique. Incuber le gel en présence de cette solution jusqu’à apparition des bandes protéiques (20 min – 5 h)

– Lavage du gel
Laver éventuellement le gel avec une solution de 25% d’éthanol, puis conserver dans l’eau