Fichier DosageADNpicogreen.doc
Personne référente : Marc Lepetit
Date : Juin 2004
Origine : Thomas Girin et Marc Lepetit
Lien : PicoGreen®, Molecular Probe

Réservation du Victor sur calendar.yahoo.com
Yahoo! ID : bpmpvictor
Password : victor.

1. On travaille dans des microplaques 96 puits noires au Victor (fluorescence). Le dosage est effectué sur 10 µl d’extrait brut GUS ou LUC (pipeter à la pipette multicanaux). Dans chaque plaque déposer 10 µl de gamme étalon (faite dans le tampon d’extraction correspondant GUS ou LUC, stockée à -20°C) : la gamme contient 8 points de 10, 5, 2.5, 1.25, 0.625, 0.312, 0.156 ng/ml (ADN de phage lambda HindIII dilué)

2. Préparer la working solution : pour une plaque (100 puits), mélanger 50 µl de PicoGreen® avec 18,95 ml de TE. Aller au Victor.

3. Si le Victor et l’ordinateur sont éteints, mettre en marche le Victor, puis mettre en marche l’ordinateur.

4. Sur le bureau de l’ordinateur, cliquer sur « Victor ».
Une fenêtre « Wallac manager » s’affiche. Cliquer sur température « OFF ».. cliquer sur « Apply ». Cliquer sur le 2ème onglet en haut à gauche « Start run/define plate map ». Une fenêtre avec un gugusse s’affiche, cliquez sur « Suivant ».
Une fenêtre « Select protocol » s’affiche. Choisir le protocole Intégration/Thomas/TG_picogreen. Cliquer sur « Suivant ».
Une fenêtre « Specify number of plate » s’affiche avec le plan d’une plaque. Tout sélectionner (tout est bleu), puis cliquer sur « Measured ». Cliquez sur « Suivant ».
Une fenêtre « Commentaires » s’affiche, recliquez sur « Suivant ».
Une dernière fenêtre s’affiche avec « Terminer ». Attendre de rajouter la « Working solution » avant de cliquer.

5. Ajouter 190 µl de working solution dans chaque puit à la pipette multicanaux. Placer la plaque dans le Victor. Cliquer sur « Terminer ». La plaque est « avalée » par le Victor.

6. Lorsque c’est fini cliquer sur « Latest assay run », puis « File export » et sauver sur une disquette (fichier excel)