Fichier MilieuSuspensionCellArabido.doc
Personne référente : Angélique Adiveze
Ingrédients pour 1 litre :
| Milieu A | 100 ml | |
| Solution KH2PO4 | 3 ml | |
| Saccharose | 15 g | |
| Tampon phosphate | 0.5 ml |
Milieu A pour 1 litre : Les protocoles des solutions stocks et les références des produits sont indiqués après. Mettre des gants et une blouse
A dissoudre dans 1 litre d’eau MilliQ
| KNO3 | 19.65 g | |
| CaCl2 2H2O | 1.74 g | |
| MgSO4 7H2O | 1.11 g | |
| Solution de fer | 5 ml ou 10 ml (pour Aquaporine) | |
| Micro éléments | 3 ml | |
| Hydrolysat de caséine | 1 g | |
| Myo inositol | 1 g | |
| Glycine | 20 mg | |
| Vitamines | 10 ml | |
| Solution d’ANA | 2 ml |
Alicoter en 200 ml ou 400 ml dans des pots de 250 ou 500 ml. Conserver à -20°C.
100 ml sont nécessaires pour 1 l de milieu de culture.
Protocoles des solutions stocks :
Solution Fer pour 1 litre : Mettre des gants et une blouse
Dissoudre dans 800 ml d’eau MilliQ 2.78 g de Fe SO4 7H2O et 4.11 g de Na2EDTA 2H2O.
Compléter à 1 l et conserver à 4°C à l’abri de la lumière.
Micro éléments pour 1 litre : Mettre des gants et une blouse, peser le CoCl2 sous la hotte chimique.
Dissoudre dans 1 l final d’eau MilliQ:
| H3BO3 | 6.20 g | |
| MnSO4 H2O | 16.9 g | |
| ZnSO4 7H2O | 10.58 g | |
| KI | 820 mg | |
| Na2MoO4 2H2O | 250 mg | |
| CoCl2 6H2O | 25 mg | |
| CuSO4 5H2O | 25 mg |
Autoclaver et conserver à 4° c.
Vitamines pour 100 ml : Mettre des gants et une blouse
Dissoudre dans 100 ml final d’eau MilliQ :
| Thiamine HCl | 40 mg | |
| Acide nicotinique | 50 mg | |
| Pyridoxine HCl | 50 mg |
Solution d’ANA pour 100 ml : Mettre des gants et une blouse
Dissoudre dans 100 ml final :
Dissoudre 100mg d’ANA dans 1 ml de NaOH 0.5 N. Compléter à 100 ml avec de l’éthanol à 30%.
Alicoter dans des tubes et conserver à -20°C
Solution KH2PO4 pour 1 litre
Dissoudre 17 g de KH2PO4 dans 800 ml d’eau MilliQ.
Ajuster à 1 litre et conserver à 4°C.
Tampon phosphate
Dissoudre 4.91 g de NaH2PO4 H2O dans 200 ml final d’eau MilliQ.
Dissoudre 10.73 g de Na2HPO4 7H2O dans 200 ml final d’eau MilliQ.
Préparer le tampon phosphate en mélangeant 39 ml de la solution de NaH2PO4 et 61 ml de la solution de Na2HPO4.
Conserver à 4°C.
Références des produits :
| Sigma | Euromedex | |||
|---|---|---|---|---|
| KNO3 | P8291 | CaCl2 2H2O | T885 | |
| Hydrolysat de caséine | C8845 | MgSO4 7H2O | P027 | |
| Myo inositol | I5125 | Na2EDTA 2H2O | EU0007 | |
| ANA | N0640 | H3BO3 | 50765 | |
| Thiamine HCl | T3902 | Saccharose | 200-301-B | |
| Acide nicotinique | N0765 | |||
| Pyridoxine | P8666 | |||
| MnSO4 H2O | M7634 | |||
| ZnSO4 7H2O | Z4750 | |||
| KI | 207969 | |||
| Na2MoO4 2H2O | M1651 | |||
| CoCl2 6H2O | 202185 | |||
| CuSO4 5H2O | C3036 | |||
| FeSO4 7H2O | F7002 | |||