Fichier ColorationNitrateArgent.doc
Personne référente : Brigitte Touraine
Référence : Proteomics, 1(11):1359-1363 (2001)
Points importants : Travailler impérativement sous sorbonne
| Concentration finale |
100 ml | 1 gd gel | 2 gd gel | |
|---|---|---|---|---|
| 1. Fixation : 2 heures ou overnight | ||||
| Méthanol | 50% | 50 ml | 150 ml | 300 ml |
| Acide acétique | 12% | 12 ml | 36 ml | 72 ml |
| Formaldéhyde 30% | 0.05% | 138 µl | 150 µl | 300 µl |
| H2O | qsp | 37.87 ml | 114 ml | 228 ml |
| 2. Lavages : 3 fois 20 min | ||||
| Ethanol | 35% | 105 ml | 210 ml | |
| H2O | qsp | 195 ml | 390 ml | |
| 3. Sensibilisation : 2 minutes | ||||
| 100 mM Na2S2O3 | 0.02% | 1.2 ml | 4.8 ml | 9.6 ml |
| H2O | qsp | 147.5 ml | 595.2 ml | 1190.4 ml |
| 4. Lavages : 3 fois 5 min avec H2O | ||||
| 5. Coloration : 20 minutes | ||||
| Nitrate d’argent | 0.2% | 0.3 g | 0.6 g | 1.2 g |
| Formaldehyde 30% | 0.076% | 114 µl | 228 µl | 456 µl |
| H2O | qsp | 150 ml | 300 ml | 600 ml |
| 6. Lavages : 2 fois 1 min avec H2O | ||||
| 7. Développement : 5 à 10 min (observer la réaction et arrêter quand elle est suffisante) | ||||
| Na2CO3 | 6% | 9 g | 18 g | 36 g |
| Formaldéhyde 30% | 0.05% | 75 µl | 150 µl | 300 µl |
| 100 mM Na2S2O3 | 0.0004% | 24 µl | 48 µl | 96 µl |
| H2O | qsp | 150 ml | 300 ml | 600 ml |
| 8. Solution d’arrêt : 5 min | ||||
| Méthanol | 50% | 75 ml | 150 ml | 300 ml |
| Ac. acétique | 12% | 18 ml | 36 ml | 72 ml |
| H2O | qsp | 57 ml | 114 ml | 228 ml |
| 9. Conservation | ||||
| Ac. acétique | 1% | 1.5 ml | 3 ml | 6ml |
| H2O | qsp | 148.5 ml | 297 ml | 594 ml |