Fichier protocole_in_vitro_boite_verticale.doc
Personne référente : Hugues Baudot
Dans ce système, les plantes d’Arabidopsis poussent en système fermé sur un milieu nutritif type MS ou autre selon expérimentation.
1.1 Le matériel nécessaire.
– Une boite de pétri carré 12 x 12, vendue au magasin devant recevoir le milieu de culture gélosé.
– Un petit tube eppendorf de 1.5 ml utilisé pour stériliser les graines.
– Un petit récipient stérile pour suspendre les graines.
– Une pipette P200.
– Des cônes pour P200 passés à l’autoclave.
– Une lame de scalpel stérile.
– De l’eau stérile.
1.2 Mise en œuvre du dispositif. (Toute l’opération se fait sous hotte stérile)
1. Couler la gélose dans vos boites de pétri (environ 40 ml/boite) et attendre couvercle ouvert son refroidissement. Repositionner le couvercle.
2. Stériliser vos graines (voir protocole stérilisation des graines d’Arabidopsis thaliana).
3. Diluer vos graines dans de l’eau stérile, par exemple dans une petite boite de pétri ronde.
4. Couper 1 mm de l’extrémité d’un cône P200 à l’aide de la lame de scalpel pour permettre le passage des graines une à une.
5. Pipeter environ 100 à 150 µl du mélange eau graines et par une légère pression sur le piston de la pipette, déposer en ligne une à une les graines sur la gélose à environ 2 cm d’un des bords de la boite. Les graines peuvent même descendre seules sur la gélose par simple capillarité.
6. Enfin, refermer les boites soit avec de l’Urgopore, un petit morceau de scotch sur deux des quatre cotés, ou du Parafilm et les disposer sur les portoirs prévus pour les boites verticales.
Pour se procurer le matériel nécessaire à la réalisation de ce dispositif de culture, l’expérimentateur doit s’adresser au magasin et/ou au responsable des installations de culture.
Toutes mises en place de ce dispositif en chambre de culture doit avoir été inscrit au préalable sur le planning de réservation en ligne à l’adresse suivante : U:\_A_DEPLACER\CHAMBRES DE CULTURES par la personne ressource de son équipe.