Mardi 30 mars 2004

Françoise Cellier & Thomas Girin (UMR B&PMP : Equipe Fer et Equipe Intégration)
Séminaire technique : Criblage de mutants de régulation à l’aide d’un gène rapporteur Luciférase

Des mutants affectés sur la régulation d’un gène d’intérêt peuvent être identifiés grâce à l’utilisation d’un gène rapporteur, dont l’activité est facilement observable. Ce gène, placé sous contrôle des séquences régulatrices du gène d’intérêt, est introduit dans des plantes transgéniques. Ces plantes sont ensuite soumises à une mutagenèse aléatoire. Le criblage consiste a rechercher des mutations affectant l’expression du transgène.
Ce type de stratégie est actuellement développée au laboratoire dans les équipes Intégration et Fer chez Arabidopsis thaliana. Le gène rapporteur choisi code la luciférase (LUC), dont l’activité est révélée de manière non destructive en présence de luciférine par une caméra CCD (bioluminescence). Dans le cas de l’équipe Intégration, le gène d’intérêt est NRT2.1, qui code un transporteur de NO3-. Ce gène est réprimé par les métabolites azotés. Dans le cas de l’équipe Fer, le gène d’intérêt est AtFer1, qui code une ferritine. Ce gène est dé-réprimé en présence de fer.
Au cours de notre exposé, nous présenterons pour ces deux cribles : les différentes étapes de mise au point, les mutagenèses et les premiers résultats.