Jeudi 26 février 2004

Carine Alcon UMR BPMP (Equipe Canaux ioniques)
Etude de la localisation subcellulaire de protéines de transport en utilisant la technique de la GFP

Le travail que je présenterai a été réalisé dans le cadre du programme Génoplante  » Transporteurs membranaires : caractérisation fonctionnelle et rôle in planta « . Ce programme associe l’équipe d’Hélène Barbier-Brygoo à Gif et les équipes Aquaporine, Fer et Canaux Ioniques de l’UMR 5004 au CNRS (BPMP) de Montpellier. Il a pour objectif l’analyse de la fonction de quatre familles de gènes codant des protéines impliquées dans des transports d’eau et d’ions: les aquaporines, les transporteurs de métaux lourds Nramp, les canaux cationiques CNGC et les canaux anioniques CLC. Ma contribution a été de développer les approches de localisation subcellulaires de ces protéines en utilisant la technique de la GFP couplée à la microscopie confocale. Le travail de mise au point méthodologique et une série de premières analyses ont été effectués à Gif, pendant la première année du CDD. Les six derniers mois du contrat ont été réalisés à Montpellier, avec pour objectif de transférer les acquis méthodologiques et de participer aux premières études.
Les protéines ont été fusionnées à deux marqueurs, la GFP ou à la DsRed et exprimées dans différents systèmes: de manière transitoire dans les cellules d’épiderme d’oignon, dans les protoplastes issus de cellules en culture d’Arabidopsis, ou dans des cellules en culture d’Arabidopsis, ou de façon constitutive dans des plantes transgéniques.
L’essentiel de mon exposé concernera le travail de développement d’une série de marqueurs (à la fois avec la GFP et la DsRed) de différents compartiments cellulaires, pour les systèmes d’expression transitoire et la plante entière. Quelques exemples de localisation de protéines membranaires seront ensuite présentés.